基金项目:无锡市医院管理中心医学技术重大扶持项目
文章编号:1007-4287(2013)01-0103-04
烧伤患者巨细胞病毒复发感染及其
对患者预后的评估价值
龚 芳1*,
潘宇红1,吕国忠2,丁羚涛2,姜东林1,陈 江1(无锡市第三人民医院1.检验科;2.烧伤外科,江苏无锡214041
)摘要:目的 观察烧伤病人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)复发感染情况及对预后的影响。方法 对96例烧伤总体表面积(total body 
surface area,TBSA)>15%的患者进行动态观察。试验分组:(1)按烧伤面积将
患者分为三组:Ⅰ组39例(TBSA 15%-49%),Ⅱ组32例(TBSA 50%-69%),Ⅲ组25例(TBSA 70%-99%);(2)根据脓毒血症诊断标准,将患者进一步分为脓毒症组(33例)和非脓毒症组(63例);(3)根据脓毒症组患者的预后情况,将其分为死亡组(11例)和生存组(22例)。入院24h内采集患者外周静脉血筛查抗HCMV IgG及HCMV-DNA,而后每隔1周左右采集病人血清标本,采用实时荧光定量PCR方法检测血清中HCMV-DNA水平。结果 (1)Ⅰ组、
Ⅱ组和Ⅲ组的HCMV复发感染率分别为53.8%、50.0%和80.0%,Ⅲ组与其他两组之间差异有统计学意义(χ2
=6.
069,P<0.05)。(2)三组烧伤患者HCMV首次复发时间及每次复发持续时间差异无统计学意义(P>0.05)。HC-MV平均首次复发时间为入院后第14天,每次复发持续时间约为12天。(3
)脓毒症组HCMV的复发感染率明显高于非脓毒症组(χ2=4.431,P<0.05),HCMV复发感染率与死亡率不相关(χ2
=0.
688,P>0.05)。结论 烧伤患者HCMV复发感染率高,HCMV复发感染可能对烧伤后脓毒症的发生具有一定影响。
关键词:烧伤;人巨细胞病毒;实时荧光定量PCR中图分类号:R644
文献标识码:A
Analyses on the current status and significance of human cytomegalovirus reactivation in burn patients GONG Fang,PAN Yu-hong,LV Guo-zhong,et al.(Department of Laboratory medicine,Wuxi No3 Hosp
ital,Wuxi 214041,China)Abstract:Objective To investigate the current status and significance of human cytomegalovirus reactivation inburn patients.Methods (1)A total of 96patients with total burn surface area(TBSA)larger than 15%were includedin the study and divided into 
three groups according to the burn area:GroupⅠ(TBSA of 15%-49%,n=39),GroupⅡ(TBSA of 50%-69%,n=32)and GroupⅢ(TBSA of 70%-99%,n=25).(2)According to whether there was develop-ment of sepsis or not,patients were divided into sepsis group(n=33)and non-sepsis group(n=63).(3)The patientswith sepsis were further divided into non-survival group(n=11)and survival group(n=22).The periphery bloodsamples from 96patients were collected on admission and then once a week until the patients were discharged from thehospital.We assessed HCMV viremia by real-time polymerase chain reaction and clinical outcome in burn patients.Re-sults (1)The rate of HCMV reactivation in GroupⅠ,GroupⅡand GroupⅢi
s 53.8%,50.0%and 80.0%,andGroupⅢis higher than the other two groups(χ2
=6.
069,P<0.05).(2)There was no significant difference in time ofHCMV reactivation and duration of HCMV viremia among the patients with different burn size.The average day tofirst detectable HCMV viremia is about 14days after admission.Duration of HCMV viremia is around 12day
s.(3)HCMV reactivation was associated sepsis(χ2
=4.431,P<0.05).There were no differences on mortality rate betweenpatients with and without HCMV reactivation(χ2
=0.
688,P>0.05).Conclusion HCMV reactivation rate is consid-erable in burn patients and might influence the development of severe sep
sis in patients with burn.Key 
words:Burns;Human cytomegalovirus;Real-time polymerase chain reaction(Chin J Lab Diag
n,2013,17:0103)  目前临床上免疫低下的病人继发严重的病毒感染现象时有报道[1]
。Ljung
man[2]研究发现免疫低下的病人易发人巨细胞病毒(human cytomeg
alov-irus,HCMV)
感染,从而导致发病率和死亡率增加。烧伤是常见的机体损伤之一,是诸多因素作用于机
301—中国实验诊断学 2013年1月 第17卷 第1期
常处于免疫低下状态,导致感染率增加[2]。因此本研究拟采用实时荧光定量PCR方法,研究中国苏南地区烧伤患者HCMV复发感染情况。通过对同一病例不同时间点采样分析,研究HCMV复发感染动力学特点,并进一步探讨HCMV复发感染和烧伤患者预后情况的相关性。
1 材料与方法
1.1 一般资料
标本采集对象为2011年1月至2011年12月收治于无锡市第三人民医院烧伤科的烧伤病人。病例入选标准:①征得患者本人或其亲属知情同意;②年龄≥18岁;③TBSA>15%;④患者生存期>72h;⑤入院24h内检测外周血抗HCMV IgG抗体阳性,HCMV DNA为阴性;⑥患者无免疫缺陷情形(如器官移植或造血干细胞移植,HIV感染,先天性免疫缺陷或正在使用免疫抑制剂)。根据上述标准,本研究入选的病例共有96例,其中男65例,女31例。按烧伤面积将患者分为3组:Ⅰ组39例(TB-SA 15%-49%),Ⅱ组32例(TBSA 50%-69%),Ⅲ组25例(TBSA 70%-99%);根据脓毒血症诊断标准[3],将患者进一步分
为脓毒症组(33例)和非脓毒症组(63例);根据脓毒症组患者的预后情况,将其分为死亡组(11例)和生存组(22例)。入选患者每隔1周左右采集血清标本,置-20℃冻存,直至病人出院或死亡。本研究征得笔者单位医学伦理委员会的批准。
1.2 ELISA检测血清中抗HCMV IgG抗体
使用北京现代公司的HCMV IgG抗体检测试剂盒检测血清中的抗IgG抗体。抗HCMV IgG抗体阳性表示HCMV既往感染。
1.3 实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA
HCMV核酸扩增荧光定量检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司。按照试剂说明书进行血清中病毒DNA的提取、参考品稀释和处理以及PCR扩增。实时荧光定量PCR在LightCycler(Roche Diagnostics公司)荧光定量PCR仪上进行。反应程序为93℃2min预变性;93℃5s,57℃45s,40个循环。每次扩增试验均严格按照试剂盒提供的阳性标准品做标准曲线,试验设阴性、阳性及空白对照(由PBS代替病毒DNA)。
1.4 统计分析
数据以珚x±s表示,应用SPSS11.0统计软件进异有统计学意义。
2 结果
2.1 入选病例基本情况
根据病例入选标准,本研究入选的病例共有96例,男65例,女31例。其基本资料如表1所示。按TBSA将患者分为3组:Ⅰ组39例,TBSA 15%-49%[(32.4±7.1)%];Ⅱ组32例,TBSA 50%-69%[(51.3±10.4)%];Ⅲ组25例,TBSA 70%~99%[(83.5±12.1)%]。根据脓毒血症诊断标准[3],将患者进一步分为脓毒症组(33例)和非脓毒症组(63例);根据脓毒症组患者的预后情况,将其分为死亡组(11例)和生存组(22例)。
表1 入选烧伤病例基本资料
组别
性别
(男/女)
例数年龄(岁)
烧伤面积
(TBSA%)Ⅰ组24/15 39 32.3±10.1 32.4±7.1
Ⅱ组21/11 32 38.5±6.9 51.3±10.4**
Ⅲ组20/5 25 35.7±7.5 83.5±12.1##脓毒症组25/8 33 33.6±5.1 65.1±5.4△△
非脓毒症组40/23 63 34.3±6.8 41.8±6.3
死亡组9/2 11 35.7±6.3 73.8±18.7▲▲
生存组16/6 22 31.7±9.5 51.9±12.3**
  **与Ⅰ组比较,P<0.01;##与Ⅱ组比较,P<0.01;△△与非脓毒症组比较,P<0.01;▲▲与生存组比较,P<0.01
2.2 HCMV复发感染动力学特点
3组烧伤病人的HCMV复发感染率分别为:Ⅰ组53.8%,Ⅱ组50.0%,Ⅲ组80.0%(表
2)。Ⅲ组与其他两组不同烧伤面积患者之间差异有统计学意义(P值<0.05)。57例HCMV复发阳性患者中20例出现了2-3次复发感染。HCMV首次复发时间及每次复发持续时间在3组间差异均无统计学意义(表3)。HCMV平均首次复发时间约为入院后第14天,持续时间约为12天/次。
表2 3组烧伤病人HCMV复发感染率组别例数
HCMV-DNA
阳性(例)
HCMV复发
感染率(%)Ⅰ组39 21 53.8
Ⅱ组32 16 50.0
Ⅲ组25 20 80.0
χ26.069
—Chin J Lab Diagn,January,2013,Vol 17,No.1
表3 3组烧伤病人HCMV复发感染特点
组别HCMV-DNA
阳性(例)
HCMV首次复发
时间(天)
HCMV复发
持续时间(天/次)
Ⅰ组21 15.0±8.3 11.6±10.9
Ⅱ组16 14.0±8.0 12.5±9.2
Ⅲ组20 13.4±5.1 12.6±7.5
2.3 HCMV复发感染和烧伤患者预后情况相关性分析
研究发现脓毒症组HCMV的复发感染率明显高于非脓毒症组(P<0.05,表4),而HCMV复发感染率与死亡率不相关(P>0.05,表5)。
表4 HCMV复发感染与脓毒血症的关系
组别例数HCMV-DNA
阳性(例)
HCMV复发
感染率(%)
非脓毒症组63 34 54.0脓毒症组33 25 75.8
χ24.341P0.037表5 HCMV复发感染与预后的关系
组别例数HCMV-DNA
阳性(例)
HCMV复发
感染率(%)
生存组22 15 68.2
死亡组11 9 81.8
χ20.688
P0.407
3 讨论
HCMV是疱疹病毒科β亚科中基因组最大的DNA病毒,在人中感染非常广泛,我国成人感染率达
95%以上,通常呈隐性感染,多数感染者无临床症状,但在一定条件下(如免疫缺陷或免疫抑制状态)侵袭多个器官和系统可产生严重疾病。HCMV在烧伤模型中的研究始于上个世纪70年代,由于烧伤患者死于HCMV病毒感染相关症状而被发现[4,5]。早期的研究发现约18%-22%的烧伤病人发生HCMV原发感染,另外约50%的烧伤患者发生HCMV激活而复发感染[6,7],但是和烧伤患者死亡率无关[7]。但是动物实验发现,感染小鼠巨细胞病毒(mouse cytomegalovirus,MCMV)的烧伤小鼠对后续细菌感染易感性增加,从而导致死亡率上升[8,9]。以上早期临床观察和动物实验中不一致的结果提示,在临床烧伤病例中,HCMV复发感染和死亡率之间的关联还有待进一步研究。由于条件所限,早期研究均基于血清抗体学开展[4-9]。近年来,随着分子生物学的发展,HCMV感染的诊断方法也精确定量体内病毒DNA拷贝数,实时荧光定量PCR已逐步成为诊断HCMV感染的首选[10]。
因此,本研究采用实时荧光定量PCR方法对来自中国苏南地区的96例烧伤患者进行分析发现HCMV复发感染率分别为:Ⅰ组为53.8%,Ⅱ组为50.0%,Ⅲ组为80.0%,提示烧伤患者HCMV复发感染率高,尤以重度烧伤患者(Ⅲ组)的HCMV复发感染率高。三组患者HCMV首次复发时间以及复发持续时间相似,其差异无统计学意义。平均首次复发时间约为入院后第14天,提示烧伤患者出现HCMV复发感染机会多在烧伤早期。近年来其他相关研究也有与之相似的结果:美国的LimayeAP研究小组[11]通过对20例TBSA大于40%的烧伤病人研究发现,HCMV复发
感染率为55%,HC-MV首次复发时间以及持续时间分别为的入院后第19天和20天。新近法国Bordes J[12]研究小组报道,21例TBSA>15%的烧伤患者的HCMV复发感染率为71%,HCMV首次复发时间约为入院后第13天。因而预防HCMV感染即应从烧伤后第2周开始进行。
HCMV除了由于自身复制而能直接引起组织损伤外,还能在免疫低下状态的患者引起一系列间接效应,如继发细菌及真菌感染机率增大、罹患心血管疾病机率增大及死亡率增加[11]。在器官移植病人,预防性抗HCMV病毒已被证实能减少继发感染,减少患者住院时间以及降低死亡率[13,14]。因此我们进一步观察HCMV复发感染对烧伤患者预后的影响。本研究中我们观察到脓毒症组HC-MV复发感染率明显高于非脓毒症组,而死亡组和生存组间HCMV复发率无差异。表明HCMV复发感染和烧伤后并发脓毒血症相关。因此如能早期积极进行抗HCMV病毒,有可能对临床设计合理的药物及判断预后,减少患者住院时间,减轻患者经济负担有重要意义。然而本研究属于观察性(observational)研究,且目前临床上也还未建立起烧伤患者抗HCMV病毒疗法,因此HCMV复发感染率和患者预后是否存在因果关系还有待深入探讨论证。
作者简介:龚芳(1982-),女,江苏人,主管检验师,博士,从事感染免疫及免疫调节的研究。
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(收稿日期:2012-01-05)
—Chin J Lab Diagn,January,2013,Vol 17,No.1