Vol.32No.3May 202
李丹1
，刘宝英2
，余明明1
，庄海林1
福州职业技术学院，揭金花1
，吴涵梅
1
(1．福建卫生职业技术学院，福建福州
350101；2．福建医科大学公共卫生学院，福建
福州
350108)
NFKBIA polymorphism,eating habits and susceptibility to gastric
cancer:a case-control study
LI Dan 1,LIU Baoying 2,YU Mingming 1,ZHUANG Hailin 1,JIE Jinhua 1,WU Hanmei 1
(1.Fujian Health College,Fuzhou 350101;2.School of Public Health,
Fujian Medical University,Fuzhou 350108,Fujian,China)
收稿日期：2020-02-22；修订日期：2020-04-12
基金项目：福建省中青年教师教育科研项目(JAT171030)作者信息：李丹，E-mail ：ldaz1119@163
【摘要】目的：分析NFKBIA 基因多态性、饮食习惯及其交互作用与胃癌易感性的关系。方法：采用1∶1配对病例对照研究设计，收集2013年4月—2017年6月福建仙游县医院587例胃癌新发病例和按性别、年龄匹配的587例健康人为研究对象，采用自制调查表收集一般情况、饮食习惯等资料，利用Sequenom MassARRAY SNP 方法检测外周血NFKBIA 基因rs696位点的基因型。应用条件logistic 回归模型分析饮食习惯、基因型对胃癌发病风险的影响，利用叉生分析结合logistic 回归模型和Andersson 等编制的Excel 表进行基因与环境的交互作用分析。结果：快速饮食、不规律进餐、高盐饮食和经常摄入腌菜是胃癌发生的危险因素，OR(95%CI)分别为1.53(1.20，1.95)、1.55(1.16，2.08)、1.51(1.17，1.94)、2.78(2.01，3.85)；NFKBIA 基因rs696位点携带AG 基因型、AA 基因型、显性模型(AG+AA)增加胃贲门癌发病风险。此外，rs696位点AA 基因型与高盐饮食、经常摄入腌菜存在联合作用，rs696位点显性模型(AG+AA)与快速饮食、高盐饮食、经常摄入腌菜存在联合作用，均增加胃贲门癌发病风险。结论：不良饮食习惯是胃癌发生的危险因素，NFKBIA 基因rs696位点AA 基因型、显性模型(AG+AA)增加胃贲门癌发病风险，且与饮食习惯存在联合作用。
【关键词】胃癌；NFKBIA 基因多态性；炎症信号通路；饮食习惯；交互作用
中图分类号：R181
文献标志码：A
文章编号：1004-616X(2020)03-0198-05
doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2020.03.008
【ABSTRACT 】OBJECTIVE ：To analyze relationships between NFKBIA gene polymorphism ，eating habits and susceptibility to gastric cancer.METHODS ：1∶1matched case-control study was carried out with 587newly-diagnosed primary gastric patients and 587controls matched by sex and age in the Fujian Xianyou hospital from April 2013to June 2017.The data of general information and eating habits were collected by a self-made questionnaire.The Sequenom MassARRAY SNP detection method was used to detect the genotype of NFKBIA gene rs696locus.Condition logistic regression was used to analyze the effects of eating habits and genotypes on risk of gastric cancer.Forked analysis ，logistic regression model and Excel table compiled by Andersson were used to evaluate the interactive effects of NFKBIA polymorphism and eating habits.RESULTS ：Fast eating ，irregular meals ，high salt diet and often pickle intakes were the risk factors of gastric cancer.OR(95%CI)were 1.53(1.20，1.95)，1.55(1.16，2.08)，1.51(1.17，1.94)，2.78(2.01，3.85)respectively.The NFKBIA rs696locus AG genotype ，AA genotype and dominant model (AG+AA)increased the risk of gastric cardia cancer.I
n addition ，the interaction effects were found on rs696AA genotype with high salt diet and pickle intakes.The interactive effects were also found on the rs696dominant model (AG +AA)with fast eating ，high salt diet and often intake pickles.CONSLUSION ：Bad eating habit was a risk factor of gastric cancer.The NFKBIA rs696AA genotype ，the dominant model (AG+AA)increased the risk of gastric-cardia cancer and had an interaction effect with eating habits.
【KEY WORDS 】gastric cancer ；NFKBIA polymorphism ；inflammation signaling pathway ；eating habits ；interaction
effects
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期
胃癌的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果，其中基因多态性被认为是最重要的遗传因素。非可控性炎症在胃癌的发生、发展中扮演着十分重要的角[1]，胃部慢性炎症是由物理化学因素刺激、遗传因素、病原体感染和免疫失衡等多病因综合作用的结果[2]，其中不良饮食习惯引起的物理性化学性刺激
对诱发胃部慢性炎症和胃癌不容忽视。NF-κB信号通路是炎症反应调节的重要通路，NFKBIA是该通路关键节点NF-κB复合物抑制蛋白IκB的编码基因，其基因多态性的改变可间接导致NF-κB调控基因编码产物的异常。rs696位点位于NFKBIA基因3′UTR端，其多态性改变增加多种肿瘤发生的风险[3-4]，而Zhang等的一项Meta分析显示rs696位点GG+GA基因型在肿瘤的发生中起保护作用[5]，其多态性改变可增加胃贲门癌发生的风险[6]，同时其与不良饮食习惯间的交互作用可能增加胃癌发生风险，但尚未见报道。本次研究旨在分析NFKBIA基因rs696位点多态性、饮食习惯及其交互作用对胃癌的影响，探讨环境中物理性、化学性致炎因子与炎症信号通路相关基因单核苷酸多态性
(single nucleotide polymorphism，SNP)的联合作用模式，为胃癌病因学研究及其预防提供科学依据。
1对象与方法
1.1研究对象
采用1∶1配对病例对照研究方法，收集2013年4月至2017年6月福建省仙游县医院经病理确诊的587例新发胃癌患者作为病例组，其中贲门癌患者263例，非贲门癌患者324例。排除胃部良性病变及其他恶性肿瘤者及病危无法清晰回答问题的患者。健康对照选择：按性别、年龄±3岁与病例进行1∶1配对，选取与病例相同乡镇或胃癌死亡率相近乡镇的健康人作为对照，无肿瘤病史，共纳入对照587例。其中男性病例425例，女性病例162例，年龄在33~90岁，平均年龄(65.3±9.9)岁；健康对照587例，其中男性对照4
25例，女性对照162例，年龄在33~87岁，平均年龄(65.3±9.7)岁。
1.2调查方法
采用自制调查问卷，调查问卷参考文献资料及当地特生活习惯编制，由经过统一专业培训后的调查人员对病例组和对照组人员进行面访式资料收集，包括研究对象的一般人口学特征及饮食习惯等，收集前外周血5mL，放置冷藏箱中半小时内分装成血浆、白细胞、红细胞，于-80℃低温冰箱保存，用于DNA提取及基因分型。1.3基因分型检测
采用红细胞裂解法提取血液标本基因组DNA，检测DNA浓度和纯度。PCR的引物为：上游5′-ACGTTG
GATGAAAATGAGGGCTGATCCTAC-3′；下游5′-ACG TTGGATGGTGTACTTATATCCACACTGC-3′。Sequenom MassARRAY SNP方法检测过程结合多重PCR技术、MassARRAY iPLEX单碱基延伸技术和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight，MALDI-TOF)进行分型检测。
1.4质量控制
由研究设计者对调查员进行统一培训并对调查问卷中的各变量进行明确定义。调查结束后及时整理调查表，复查核实，对缺漏项及时填补，并剔除不合格问卷。采用盲法判读基因型，并随机选择2%的样本进
行盲法重复检测，重检一致率为100%。其中12例未检出样本已予以剔除，DNA质量及浓度合格率98.99%。全部位点的分型成功率超过99.0%。
1.5统计学分析
利用EpiData 3.1软件双录入调查资料，应用SPSS20.0软件整理分析数据；采用χ2检验进行一般人口学特征均衡性检验；采用条件logistic回归分析多态位点基因型的比值比(odds ratio，OR)及95%CI；采用叉生分析结合logistic回归模型分析基因与环境的联合作用及相乘交互作用，采用Andersson等编制的EXCEL表分析基因与环境的相加交互作用，交互作用相对超额危险度(relative excess risk due to interaction，RERI)、归因比(attributable proportion due to interaction，AP)、交互指数(synergy index，S) 3个指标评价相加交互作用，若两因素无相加交互作用，则RERI和AP的可信区间应包含0，S的可信区间应包含1，反之则存在相加交互作用；所有的统计检验均为双侧概率检验，检验水准α=0.05。
2结果
2.1一般情况
均衡性检验结果显示，除文化程度和BMI外，其他因素均衡可比，见表1。经条件logistic回归分析显示高
中及以上文化程度是胃癌保护因素，其OR(95% CI)为0.60(0.40，0.91)；BMI≥24kg/m2是保护因素，其OR(95%CI)为0.45(0.33，0.61)；BMI<18.5kg/m2为危险因素，其OR(95%CI)为1.89(1.30，2.75)。
2.2饮食习惯与胃癌易感性分析
经调整年龄、文化、婚姻、职业、BMI
，快速饮
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食、不规律进餐、高盐饮食和经常摄入腌菜是胃癌发生的危险因素，OR (95%CI )分别为1.53(1.20，1.95)、1.55(1.16，2.08)、1.51(1.17，1.94)、2.78(2.01，3.85)，除进餐时间是否规律外，其他饮食习惯与贲门癌和非贲门癌的关系相同，见表2。
2.3rs696位点基因型与胃癌易感性分析
结果显示该位点符合Hardy-Weinberg 遗传平衡定律(χ2=2.047，P =0.152)。在调整了年龄、文化等因素之后，经条件logistic 回归分析结果显示，rs696位点AG 基因型、AA 基因型及显性模型(AG+AA)与贲门癌发生有关，且均增加贲门癌发生的风险(P <0.05)，见表3。
2.4rs696位点基因型与饮食习惯联合作用及交互作用与贲门癌易感性分析
在贲门癌中，携带rs696位点AA 基因型且高盐饮食发生贲门癌的风险是携带rs696G 等位基因且清淡饮食的8.34倍；携带rs696位点AA 基因型且经常摄入腌菜发生贲门癌的风险是携带rs696位点G 等位基因且未吃或偶尔吃腌菜的5.49倍；携带rs696位点A 等位基因且快速饮食发生贲门癌的风险是携带rs696位点GG 基因型且饮食速度较慢的2.85倍；携带rs696位点A 等位
基因且高盐饮食患贲门癌的风险是携带rs696位点GG 基因型且清淡饮食的14.38倍；携带rs696位点A 等位基因且经常摄入腌菜发生贲门癌的风险是携带rs696位点GG 基因型且未吃或偶尔吃腌菜的9.62倍。未发现rs696位点与饮食习惯的相乘和相加交互作用，见
表4~表6。
3讨论
胃癌的发生发展是一个多因素综合作用的结果。不合理的饮食方式常常会诱发胃癌的发生并影响胃癌
a
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的进展，而合理健康的饮食方式则会阻断胃癌的形成[7]。本次研究结果显示快速饮食、不规律进餐、高
盐饮食和经常摄入腌菜是胃癌发生的危险因素，调整OR 及95%CI 分别为1.53(1.20，1.95)、1.55(1.16，2.08)、1.51(1.17，1.94)和2.78(2.01，3.85)。研究发现，饮食速度过快及不规律进餐会造成胃液分泌紊乱，胃结肠反射作用失调，未被食物中和的胃酸侵蚀胃黏膜，造成化学性损伤，可能导致慢性胃炎或溃疡，同时饮食速度过快可引起急性胃扩张，增加胃部疾病患病风险，同多项研究结果相似[8-11]。高浓度盐可直接刺激胃黏膜保护层，损伤胃腔内壁细胞，引起炎性再生反应，诱发慢性炎症，使DNA 合成异常及细胞增殖恶性增加，导致胃癌的发生[12]，同多项研究结果相似[8，13]。经常摄入腌菜发生胃癌的风险是未摄入或偶尔摄入腌菜的2.78倍，OR (95%CI )为(2.01，3.85)。流行病学研究与动物实验表明腌菜中含有的亚硝酸盐和硝酸盐，
在合适的条件下生成N-亚硝基化合物，使胃癌发生风险增加。加之腌制食品本身为高盐食物，可直接损伤胃黏膜增加癌前病变的风险。贲门癌和非贲门癌在流行病学、易感因素方面不同[14]，但本次研究在饮食习惯上发现除三餐是否规律外，其他饮食习惯与贲门癌和非贲门癌的关联方向相同。
研究表明，人类遗传基因的各种差异有90%可归因于由SNPs 引起的基因变异[15]，特别地炎症相关基因多态性在胃癌启动中发挥不可忽视的作用。非可控性炎症在胃癌的发生发展中占重要地位[16]。NF-κ
B 炎症
信号通路可调控炎症反应的基因表达[17]，在细胞的增殖、分化、凋亡及肿瘤发生等过程中都扮演重要角[18-19]。本次研究发现rs696位点AG 基因型、AA 基因型以及显性模型(AG+AA)与贲门癌发生有关，都增加贲门癌发生的风险，OR (95%CI )分别为1.63(1.04，2.55)、1.70(1.00，2.92)、1.65(1.08，2.53)，未发现其与非贲门癌的关系，与前期研究结果一致[6]。rs696位点位于3′UTR 区，其多态性可调节NF-κB 的活性[20]，IκBα是NF-κB 通路关键节点P50和P65二聚体的抑制
物，其编码基因的多态性改变可能导致通路的异常激
a
a 间、口味、腌菜后的OR (95%CI )；*P <0.05.
a 间、口味、腌菜后的OR (95%CI ).
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活，与靶基因相应部位结合，开启相关基因的转录。
为进一步分析基因与环境交互作用对贲门癌的作用特点，通过联合作用和相乘、相加交互作用分析发现，rs696位点AA 基因型与高盐饮食、经常摄入腌菜存在联合作用，均增加贲门癌发生风险。rs696位点显性模型与快速饮食、高盐饮食和经常摄入腌菜均存在联合作用。较快进食对胃黏膜产生物理性损伤，加之高盐饮食及腌菜产生的化学刺激，诱发炎症反应，长期存在的物理和化学刺激，使炎症转为不可逆性。同时基因多态性，可增加环境暴露人贲门癌发生的易感性。
本研究采用病例-对照研究设计，在病例选择时将新发病例作为首选病例纳入，减少回忆偏倚，同时在调查过程中把握调查质量严格定义调查因素，最大程度减小偏倚增加结果可信度。综上，本研究进一步肯定了rs696位点与胃贲门癌发生的关系，同时发现其多态性位点与饮食习惯存在联合作用，为后续作进一步的机制研究提供科学数据。
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