一、填空：（9个小题，每空1分，共20分）
1、植物热处理脱毒有两种方法：一种是____处理；另一种是____处理。
2、大多数植物组织培养的适宜温度范围是____℃，培养基的pH值范围是____。
3、原生质体培养方法：____、____和____。
4、在组织培养中，不耐热的物质用____法除菌，而培养基常用____法灭菌。
5、原生质体的分离方法有____分离法和____分离法。
6、6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值____可促进根的生长；
      比值____可促进芽的生长。
7、植物种质保存的方式：____和____。
8、White培养基中____浓度低，适合试管苗的____培养。
9、单倍体细胞培养包括3方面：____、____和____培养。
二、名词解释：（5个小题，每小题3分，共15分）
 1、MS培养基 2、无病毒苗 3、细胞培养周期 4、花药培养 5、继代培养 6、培养基 7、胚状体
三、选择题：（单项选择题，10个小题，每小题1分，共10分）
1、下列实验中可能获得单倍体植株的是_________。
    A、 小麦的茎尖培养； B、番茄花药培养； C、玉米胚乳培养； D、烟草叶片培养
3、第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________：
    A、Morel；  B、 Haberland；  C、 Schleiden；  D、 White
4、、进行茎尖培养脱毒时，通常以带1～2个幼叶原基的茎尖作外植体较合适；则茎尖的长度约为（ ）。
    A、0.1～0.3mm；  B、0.2～0.5mm；  C、0.4～0.6mm；  D、 0.6～0.8mm
5、下列不属于细胞分裂素类的植物激素是_________。
    A、 6-BA；   B、 NAA；   C、 Zt；   D、 Kt
6、油菜的生根培养基配方为：MS+NAA 0.1mg/L。已知NAA的母液浓度为 2mg/mL；如配制500mL的生根培养基，需加入的NAA母液的量为（ ）
    A、0.2mL；   B、0.1mL；  C、0.05mL；  D、0.5mL
7、琼脂在固体培养基中的用量一般为（ ）g/L。
    A、6～10；   B 0.6～1.0；   C、2～6；   D、0.2～0.6
8、在进行花药和花粉培养时，最适宜的花粉发育时期是（ ）。
    A、成熟花粉粒；   B、单核花粉期；   C、二核花粉期；   D、三核花粉期
9、适合豆科和十字花科植物花药培养的培养基是（ ）。
    A、MS培养基；   B、B5培养基；   C、N6培养基；   D、White培养基
10、超低温种质保存的温度为（ ）
    A、0～15℃；  B、-80～0℃；  C、-196℃；  D、-280℃

四、判断题（对的画"√"；错题画"×"，并改正。5个小题，每题2分，共10分）
1、 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80％～90％的相对湿度。
2、幼年的细胞和组织比成年的细胞和组织诱导愈伤组织更容易。
3、一般地说，PH值高于6.5时，培养基易变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。
4、在配制6-BA母液时，要先加少量的1mol的NaOH溶解，再加温蒸馏水定容。
5、在MS的培养基成分中，化合物MgSO4.7H2O中含有微量元素Mg。
五、简答题：（5个小题，每小题5分，共25分）
1、 什么是平板培养法？它有什么特点？
2、如何对外植体进行表面消毒？
3、什么是体细胞胚？胚状体发生方式与不定芽发生方式相比有哪些特点？
4、什么是人工种子？有什么特点？
5、无土栽培过程中应注意哪些问题？
六、论述题：（3个小题，任选2个，每小题10分，共20分）
1、请你设计一个组培实验室，说明你设计组培实验室的各分室及其所需的仪器设备。
2、目前植物病毒的鉴定和检测方法有哪些？各有何特点？
3、诱导试管苗生根时应注意哪些问题？

         参考答案       
一、填空：（9个小题，每空1分，共20分）
1、温汤浸渍；高温空气
2、25±2℃；5.6-5.8
3、平板培养法、浅层液体培养、双层培养法。
4、过滤；湿热
5、机械分离法；酶法分离法
6、低；高
7、原地保存、异地保存
8、无机盐、生根
9、花药培养、小孢子培养、未受精子房及卵细胞
二、名词解释：（5个小题，每小题3分，共15分）

1、MS培养基  2、无病毒苗  3、胚状体  4、花药培养  5、继代培养
1、山西农业大学MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的（1分）。是目前应用最广泛的培养基（1分）。特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富（1分）。
2、无病毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒（1分），即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木（2分）。
3、细胞培养周期：是指具有一定起始密度的单细胞，从开始培养到细胞数目和总重量增长停止的过程（2分）。呈S型曲线分有4个时期：延迟期、直线生长期、缓慢期、静止期（1分）。
4、花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成单倍体植株的技术（3分）。
5、继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代培养（3分）。
三、选择题：（单项选择题，10个小题，每小题1分，共10分）
1、B ； 2、C； 3、B； 4、B； 5、B ； 6、C； 7、A ； 8、B ； 9、B；? 10、C
四、判断题（对的画"√"；错题画"×"，并改正。5个小题，每题2分，共10分）
1、 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80％-90％的相对湿度。（70％-80％）
2、幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。（对）
3、一般的说，PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。（对）
4、配制6-BA母液时，要先加少量的0.1～1mol的NaOH溶解，再加蒸馏水定容。( HCI )
5、在MS的培养基成分中，化合物MgSO4.7H2O中含有微量元素Mg。(大量元素)

五、简答题：（5个小题，每小题5分，共25分）
1. 什么是平板培养法？它有什么特点？
   平板培养：是将单细胞悬浮液按照一定的细胞密度，接种于1mm厚的薄层固体培养基上进行培养的方法。（2分）?
特点：可以定点观察；（1分）
      分离单细胞系容易；（1分）
      培养细胞气体交换不畅。（1分）
2．如何对外植体进行表面消毒？
   1）将需要的材料用水洗干净。（1分）
   2）表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。（1分）
   3）灭菌剂处理：0.1%10分钟、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15分钟。（2分）
   4）用无菌水冲洗3-5次左右。（1分）
3．什么是体细胞胚？胚状体发生方式与不定芽发生方式相比有哪些特点？
    体细胞胚即胚状体，指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、胚和子叶胚5个时期），形成的具有双极性的胚状结构。（2分）
特点：
   1）胚状体产生的数量比不定芽多；（1分）
   2）胚状体可以制成人工种子，便于运输和贮藏；（1分）
   3）胚状体的有性后代遗传性更接近母体植株。（1分）
4．什么是人工种子？有什么特点？
   1）、定义：指通过植物组织培养方法获得的具有正常发育能力的材料，外面包被特定的物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。（2分）
  2）、人工种子特点：
    （1）具有良好发育的体细胞胚并能发育成正常完整植株。（1分）
    （2）具有人工胚乳，可提供种胚发育的营养。（1分）
    （3）具有能起到保护作用的人工种皮。（1分）
5、无土栽培过程中应注意哪些问题？
   1）、配制营养液时，忌用金属容器，更不能用它来存放营养液，最好使用玻璃、搪瓷、陶瓷器皿。 （1分）
   2）、配制营养液时如使用自来水，应加入少量的乙二胺四乙酸钠或腐殖酸盐化合物来处理水中氯化物和硫化物。（1分）
   3）基质应选用具有保水性、排水性和一定强度及稳定性，而且无害的物质。（1分）
   4）在栽培中，需经常测营养液中的pH，使其保持恒定。（1分）
   5）在水培中，植物需从营养液中吸氧，注意增加营养液中氧的含量。（1分）
六、论述题：（3个小题，任选2个，每小题10分，共20分）
1. 请你设计一个组培实验室，说明你设计组培实验室的各分室及其所需的仪器设备。
实验室组成：
（1）准备室：烘箱、冰箱、天平、、蒸馏水发生器、酸度计、高压灭菌锅；（2分）
（2）缓冲室；（1分）
（3）无菌操作室（接种室）：紫外光、超净工作台；（2分）
（4）培养室：空调机、培养架、加湿器和除湿器、恒温培养箱；（2分）
（5）驯化室：空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、光照调节装置；（1分）
（6）温室等： 空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、光照调节装置。（2分）
2. 目前植物病毒的鉴定和检测方法有哪些？各有何特点？（10分）
    1）直接检测法：直接观察脱毒植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状。（2分）
    2）指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在指示植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的标准。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法。（3分）
    3）抗血清鉴定法：用已知病毒的抗血清鉴定未知病毒的种类。这种方法特异性高，测定速度快。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。 （2分）
    4）电镜检查法：可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。优点是方法先进、灵敏度高、能在植物粗提取液中定量测定病毒。但需一定的设备和技术。（3分）
3、诱导试管苗生根时应注意哪些问题？（10分）
    1)、调节激素种类和浓度配比或除去植物激素:适当加大生长素-NAA ，不用或少用细胞分裂素。或在无激素的培养基上生根。（2分）
    2)、调节降低糖浓度:蔗糖降低到1.0-1.5%，以增强植株的自养能力。（2分）
    3)、有时还需降低无机盐浓度:应降低N，P，K盐的量，它们能抑制根的发生。（2分）
    4)生根培养基： White或1/2，1/3或1/4 MS、B5等。（2分）
    5)加活性炭：可在培养基中加入1%左右的活性炭。（1分）
    6)增加光照：为提高小植株的光合能力，可将光强度增加到3000-10000lux。（1分）

一、填空：（9个小题，每空1分，共20分）
1、组织培养植株再生的途径主要有两条：一是____，另一个是____。
2、B5培养基特点是____；MS培养基的特点是____。
3、使用植物生长调节物质时要注意：____、____。
4、茎尖分生组织培养主要是对____茎尖进行培养，目的是____。
5、由胚乳培养得到的植株，除少数是____倍体外，多数是由____细胞组成的嵌合体。
6、受精胚珠培养的目的：一是____，二是____。
7、____是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染剂是____。
8、离体培养的花粉粒成苗途径与花药培养相同，即有____和____两条途径。
9、鉴定植株的方法有____、____、____和____。
二、名词解释：（5个小题，每小题3分，共15分）
1、植物组织培养  3、平板培养法 4、无土栽培 5、连续培养

三、选择题：（单项选择题，10个小题，每小题1分，共10分）
1、KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含钼的培养基是（ ）。
  A、 White培养基；  B、 N6培养基；  C、 MS培养基；  D、? B5培养基 
2、外植体接种时，刀、剪、镊子等用具一般在使用前浸泡在（ ）中，用时在火焰上灼烧灭菌，冷却后使用。
  A、70%酒精；  B、85%酒精；  C、95%酒精；  D 、0.1%  
3、将细胞分裂素类物质配制成0.5-1mg/ml的母液时，可先用少量的（ ）溶解，再定容到所需的体积。
  A、95%酒精；  B、0.1mol NaOH；  C、85%酒精；  D、 0.1mol HCl 
4、培养室的湿度一般保持在（ ）。
  A、 50%--60%；  B、 60%--70%；  C、 70%---80%；  D、 80%--90% 
5、琼脂在固体培养基中的用量一般为（ ）g/L。
  A、  6-10；  B、  0.6-1.0；  C、  2-6；  D、  0.2-0.6
6、培养基进行高压灭菌时，当压力升到108kPa时维持15-20min，即可达到灭菌目的。此时灭菌锅内的温度可达（ ）。
  A、101℃；  B、110℃；  C、121 ℃；  D、 120℃
7、进行茎尖培养脱毒时，通常以带1-3个幼叶原基的茎尖作外植体较合适。则茎尖的长度约为（ ）。
  A、0.1-0.3mm；  B、0.3-0.5mm；  C、0.4-0.6mm；  D、 0.6-0.8mm 
8、适合水稻、小麦、玉米等禾谷类作物花药培养的培养基是（ ）。
  A、MS培养基；  B、B5培养基；  C、 N6培养基；  D、White培养基 
9、在细胞悬浮液成批培养过程中，细胞数目会不断发生变化，其中细胞数目迅速增加，增长速率保持不变的是（ ）。
  A、减慢期；  B、延迟期；  C、静止期；  D、对数生长期   
四、判断题（对的画"√"；错题画"×"，并改正。5个小题，每题2分，共10分）
1、花器脱分化比茎叶容易；幼嫩的组织比成熟的老组织脱分化难。
2、 通过子房的培养，既可能得到单倍体植株，又可能得到二倍体植株。
3、一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，而光照强度较弱幼苗生长的粗壮。
4、在配制萘乙酸（NAA）母液时，要先加少量的0.1mol的HCl溶解，再加蒸溜水。
五、简答题：（5个小题，每小题5分，共25分）
1、试管苗与常规苗相比有哪些特点？
2、阐述外植体的成苗途径。
3、目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？
4、什么是纸桥培养法？纸桥培养的特点点是什么？
六、论述题：（3个小题，任选2个，每小题10分，共20分）
1、无菌操作接种外植体时，应注意哪些方面？
2、如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？
3．说明细胞在连续培养中，细胞数目会发生什么变化？

         参考答案       
一、填空：（9个小题，每空1分，共20分）
1、体细胞胚胎发生；器官发生
2、含较低的铵盐；较高的硝酸盐和盐酸硫胺素；无机盐的浓度高。
3、种类和浓度；生长素和细胞分裂素的比值
4、不超过0.1mm；获得无病毒植株。
5、三；各种倍性
6、用来打破种子的休眠；挽救胚的发育；以获得杂交种
7、压片染法；醋酸洋红
8、胚状体成苗；愈伤组织再分化成苗
9、形态学鉴定；细胞学观察；DNA内切图谱分析；同工酶分析

二、名词解释：（5个小题，每小题2分，共20分）
1、植物组织培养:将植物的离体器官、组织、细胞放在离体无菌条件下，在人工控制的环境条件下，培养在人工配置培养基上，使其生长、分化成植株的过程。
2、外植体: 由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织或器官等。
3、平板培养法:把单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合，并平铺一薄层在培养皿底上的培养方法。
4、无土栽培：也称水培，就是不用土壤，而用无机化肥溶液，即营养液来栽培植物的技术。
5、连续培养: 指在培养过程中，以不断抽取悬浮培养物并注入等量新鲜培养基，使培养物不断得到养分补充，保持其恒定体积的培养基。 
三、选择题：（单项选择题，10个小题，每小题1.5分，共15分）
1. B； 2.C；  3. D； 4.C； 5. A； 6. C； 7.B； 8.C； 9.D； 10.C

四、判断题（对的画"√"；错题画"×"，并改正。5个小题，每题2分，共10分）
1、花器脱分化比茎叶容易；幼嫩的组织比成熟的老组织脱分化难。 （容易）
2、 通过子房的培养，既可能得到单倍体植株，又可能得到二倍体植株。（对）
3、一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，而光照强度较弱幼苗生长的粗壮。（弱易徒长，强则壮）
4、在配制萘乙酸（NAA）母液时，要先加少量的0.1mol的HCl溶解，再加蒸馏水定容。（NaOH）
5、环境相对湿度过低会使培养基丧失大量水分；湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。（对）

五、简答题：（5个小题，每小题5分，共25分）
1、什么是植板率？小细胞团的计数方法有几种？
植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。
小细胞团的计数方法：
①在低倍显微镜直接计算视野中的小细胞团数。
②细胞团显影法。在暗室中，在平板下放一张印相纸，打开平板上方的光源，平板上的细胞团就印到相纸上，然后冲洗相纸即得细胞团呈白、培养基呈淡黑的照片，再计算白点的数目，即为形成细胞团的数目。
2、试管苗与常规苗相比有哪些特点？
(1)生长细弱；
(2)光合作用差；
(3)叶片气孔数目少，活性差；
(4)根的吸收功能弱；
(5)对逆境的适应和抵抗能力差
3、阐述外植体的成苗途径。
1) 外植体先形成愈伤组织，再形成完整植株(1) 同时长芽和根(2) 先长芽，再长根(3) 先长根，再长芽2) 形成胚状体，再发育成完整植株3) 外植体直接形成芽和根。4、目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？ 1）直接检测法；2）指示植物法；3）抗血清鉴定法；4)分子生物学鉴定法：(1)双链RNA法(dsRNA);(2)互补DNA(cDNA)检测法： 5)电镜检查法5、什么是纸桥培养法？纸桥培养的特点点是什么？纸桥培养法：用酒杯状的滤纸代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进行培养。优点是1） 培养基是液体培养基，2）营养物质能通过滤纸均衡而持久地供给外植体，3）有利于外植体的健康成长 ；缺点是 操作工艺复杂 。
六、论述题：（3个小题，任选2个，每小题10分，共20分）
1、无菌操作接种外植体时，应注意哪些方面？ (1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室； (2)在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面；(5)接种工具蘸95%酒精，灼烧；(6)接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟；(7)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(8)接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。
2、如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？
原生质体的纯化：
1）离心沉淀法：应用原生质体的比重大于溶液的性质，将原生质体沉于底部。
2）漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。
3）界面法：选用两种不同渗透浓度的溶液，使原生质体介于两种溶液之间。
原生质体活力的测定：
1）、形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜鲜艳的即为存活的原生质体。
2）、染识别：
（1）、0.1%酚蕃红或Evans蓝染，有活力的不被染，死亡的被染上。
（2）、双醋酸盐荧光素（FDA）染法：荧光显微镜下有荧光的即为有活性的原生质体。

3．说明细胞在连续培养中，细胞数目会发生什么变化？
在整个培养过程中，细胞数目不断发生变化，呈现出明显的由慢到快，再到慢，最后增长停止的细胞周期。细胞的生长呈S型曲线
1）延迟期：细胞很少分裂
2）对数生长期：细胞分裂活跃，细胞数目增加，增长速率保持不变
3）直线生长期细胞生长和发育最明显的时期
4）缓慢期生长逐渐缓慢：培养液消耗将尽，有毒代谢物质增多，氧气减少
5）静止期生长几乎处于停止状态，细胞数目增加极少，甚至开始死亡