网络出版时间：２０２１－１－２５１７：２６ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２１０１２５．１４４０．０３４．ｈｔｍｌ
组蛋白修饰变化参与曲古抑菌素Ａ缓解的
娄 毅１，丛艳飞２，丁晶晶２，李 芳２，王莉莉２
（１．中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室，辽宁沈阳 １１０１２２；２．中国医科大学附属盛京医院实验研究中心，辽宁本溪 １１７０００）
收稿日期：２０２０－１１－１６，修回日期：２０２０－１２－２７
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１９７１４５９）；辽宁省自然
科学基金资助项目（Ｎｏ２０１９ ＭＳ ３６１）
作者简介：娄 毅（
１９６３－），男，副主任技师，研究方向：遗传性疾病的发病机制，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｏｕｙｉ＿１９６３＿１０１９＠１２６．ｃｏｍ；王莉莉（１９７７－），女，博士，博士生导师，研究方向：先天畸形发育遗传学，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｌｌ＿１９７７＿２１＠１６３．ｃｏｍ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２１．０２．０１７
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２０）０２－０２４０－０５中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ１２２ ７；Ｒ３２２ ６５；Ｒ３４１ ２７；Ｒ３４５ ５；Ｒ７１１ ７４；Ｒ９７７ ３；Ｒ９７７ ６
摘要：目的 研究组蛋白修饰变化在曲古抑菌素Ａ（ｔｒｉｃｈｏｓ ｔａｔｉｎＡ，ＴＳＡ）缓解烟草烟雾（ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ，ＣＳ）暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程中的作用。方法 通过ＣＳ暴露３０ｄ方法制备ＣＳ暴露小鼠子宫损伤模型，ＣＳ暴露的同时给予ＴＳＡ进行；ＨＥ染观察各组小鼠子宫组织形态学变化；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测各组小鼠子宫组织Ｈ３Ｋ４ｍｅ１、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２、Ｈ３Ｋ４ｍｅ３、Ｈ３Ｋ９ｍｅ１、Ｈ３Ｋ９ｍｅ２、Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３总的修饰水平变化以及ＧＬＰ（ｅｕｃｈｒｏｍａｔｉｃｈｉｓｔｏｎｅｌｙｓｉｎｅｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１，Ｈ３Ｋ９甲基转移酶），Ｇ９ɑ（ｅｕｃｈｒｏ ｍａｔｉｃｈｉｓｔｏｎｅｌｙｓｉｎｅｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ２，Ｈ３Ｋ９甲基转
移酶），ＥＺＨ２（ｅｎｈａｎｃｅｒｏｆｚｅｓｔｅｈｏｍｏｌｏｇ２，Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３甲基转移酶）的表达水平。结果 ＴＳＡ缓解ＣＳ暴露所致的雌性小鼠子宫间质细胞和腺体数量减少等结构改变。ＴＳＡ有效抑制了ＣＳ暴露激活的小鼠子宫组织Ｈ３Ｋ９ｍｅ１的表达，但却进一步激活ＣＳ暴露诱导的总Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３修饰水平。ＴＳＡ可以抑制ＣＳ暴露激活的小鼠子宫组织ＧＬＰ和Ｇ９ɑ的表达，进一步激活ＣＳ暴露诱导的ＥＺＨ２表达水平。结论 组蛋白修饰变化参与ＣＳ暴露所致的小鼠子宫损伤以及ＴＳＡ的缓解损伤过程。
关键词：烟草烟雾暴露；组蛋白修饰；子宫；ＴＳＡ；Ｈ３Ｋ９ｍｅ１；组蛋白甲基转移酶
中国烟草招聘2021社会招聘开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
中国是世界上最大的烟草生产和消费国，２００２
年中国女性居民主动吸烟率为３ １％，被动吸烟率
高达５４ ６％［１］
。烟草烟雾（ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ，ＣＳ）中
含有多环芳香烃（
ＰＡＨｓ）、苯并芘（ＢａＰ）、尼古丁、生物碱和重金属等４０００多种有害化学物质［２］。研究发现，吸烟会使处于育龄期的女性生育力下降［
３］
，口服尼古丁会导致大鼠子宫腔上皮和腺上皮形态学
改变［
４］
，ＣＳ暴露可导致子宫ＭＭＰ ９、ＣＸＣＲ４和ＥＲ的表达增加［５］
。我们前期的研究表明，ＣＳ暴露通过
激活组蛋白脱乙酰基酶１
／２（ｈｉｓｔｏｎｅｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ，ＨＤＡＣ），导致小鼠子宫肌层和子宫内膜变薄，腺体组织和间质细胞明显减少等组织形态学改变，ＴＳＡ，ＨＤＡＣ的通用抑制剂，通过抑制ＨＤＡＣ１／２和ｍＴＯＲ的激活，重新激活自噬，改善ＣＳ暴露引起的
小鼠子宫组织形态学改变［６］。此外，我们还发现
Ｐ２ＲＸ７介导的细胞焦亡和凋亡参与了ＴＳＡ缓解的
ＣＳ暴露所致的小鼠子宫损伤过程［７］。因此，进一步
探究烟草烟雾暴露对女性生育能力影响的相关分子机制将为提高女性生育健康做出一定贡献。
环境毒素可以通过表观遗传学机制影响基因表达水平，进而影响个体的表型或者疾病的易感
性［８］。表观遗传学修饰包括翻译后的组蛋白修饰，
如组蛋白的乙酰化和甲基化修饰、ＤＮＡ的甲基化修饰等，表观遗传修饰在转录调节中发挥重要作
用［９－１０］。组蛋白修饰水平变化和相关组蛋白修饰转移酶的变化和很多子宫疾病有关［１１－１４］。在子宫
内膜异位症的异位内膜组织中发现全组蛋白Ｈ３Ｋ４和Ｈ３Ｋ９的低甲基化，说明组蛋白修饰异常在子宫
内膜异位症的发病中发挥重要作用［１１］。子宫内膜
异位症患者的异位子宫内膜中Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３阳性细胞百分比明显低于正常分泌型子宫内膜。此外，Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３的甲基转移酶ＥＺＨ２在子宫内膜异位症上皮细胞中高水平表达。提示Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３在子宫内膜异位症发病中的作用和Ｅ
ＺＨ２可能作为该疾病的潜在靶点［１２］。以上结果表明，组蛋白修饰和
相关转移酶的异常参与很多子宫疾病的发生发展，但组蛋白修饰和相关转移酶的变化是否参与了烟草
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烟雾暴露对子宫的毒理作用和ＴＳＡ的缓解过程，目前尚不清楚。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 实验动物 ６０日龄Ｃ５７ＢＬ／６♀小鼠３６只，体质量（２０ ０±０ ５）ｇ，购自
辽宁长生生物技术有限公司，ＳＣＸＫ（辽）２０１５ ０００１。实验动物饲养在中国医科大学附属盛京医院动物中心ＳＰＦ级动物饲养室，ＳＹＸＫ（辽）２０１７ ０００４，室温（２２±３）℃，相对湿度（５０±２０）％。针对实验动物的所有操作流程关注动物福利，并通过中国医科大学附属盛京医院医学伦理委员会批准（２０１３ＰＳ０６Ｋ；２０１９ＰＳ２６３Ｋ）。１．１．２ 试剂 雄狮牌香烟（每支含０ ７ｍｇ尼古丁和８ｍｇ焦油）；组蛋白提取试剂盒（ＥＰＩＧＥＮＴＥＫ，批号：＃ＯＰ ０００６）；ＴＳＡ（Ｓｉｇｍａ；批号：Ｔ１９５２）；免疫组化试剂盒（迈新，批号：ＫＩＴ９９２１）；一抗来源：ＧＡＰＤＨ（康成生物；批号：ＫＣ ５Ｇ４，规格：１００μＬ）；Ｈ３（ＡＢ ｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３４８）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ１（ＡＢｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３５５）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ２（ＡＢｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３５６）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ３（ＡＢｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３５７）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ１（ＡＢ ｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３５８）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ２（ＡＢｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３５９）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ３（ＡＢｃｌｏｎａｌ；批号：Ａ２３６０）；Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（ＡＣＴＩＶＥＭＯＴＩＦ；批号：６１０１７）；ＧＬＰ（Ｒ＆Ｄ；批号：ＰＰ Ｂ０４２２）；Ｇ９ɑ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ；批号：＃０９ ０７１）；ＥＺＨ２（ＣＳＴ；批号：５２４６Ｓ）；羊抗兔二抗（Ａｂｂｋｉｎｅ；批号：Ａ２３６２０）；羊抗鼠二抗（Ａｂｂｋｉｎｅ；批号：Ａ２５０１２）。
１．１．３ 实验仪器 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ垂直电泳系统（美国Ｈｏｆｆｅｒ公司）；Ｗｅｓ
ｔｅｒｎｂｌｏｔ转膜系统（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司）；ＲＭ２２３５石蜡切片机（德国Ｌｅｉｃａ公司）；组织石蜡包埋机（湖北孝感阔海医疗公司）；低温高速离心机（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）；－８０℃超低温冰箱（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）；电子天平（美国Ｇ＆Ｇ公司）ＱＳ ＲＯ型全自动超纯水机（沈阳惠思纯水设备有限公司）；生物净化工作台（中国苏净安泰公司）；眼科剪刀、镊子等必备手术器械（江苏宠宝集团医疗器械有限公司）。
１．２ 研究方法
１．２．１ 烟草烟雾暴露小鼠模型 将３６只Ｃ５７ＢＬ／６♀小鼠按随机分组的方法分为对照组、ＣＳ暴露组和ＣＳ＋ＴＳＡ组，每组１２只，对每组内的小鼠进行编号，列表记录它们的初始体质量及状态。自制实验性ＣＳ暴露装置，ＣＳ暴露方法参照本课题组前期实验［６－７］。ＣＳ暴露组和ＣＳ＋ＴＳＡ组小鼠ＣＳ暴露时间为３０ｄ，每天两次ＣＳ暴露，每次ＣＳ暴露给两支烟持续暴露２ｈ，ＣＳ暴露时间间隔为５ｈ。对照组小鼠吸入空气。药物ＴＳＡ（将ＴＳＡ溶于ＤＭＳＯ，再用生理盐水将其配制成浓度为１ ９８×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１的溶液），按０ ６μｇ·ｇ－１体质量的剂量，每２ｄ１次，腹腔内注射给ＣＳ＋ＴＳＡ组小鼠。ＣＳ暴露３０ｄ后，对处于发情期的雌性小鼠实施安乐死，并从每组中至少收集５个子宫组织用于进一步研究。１．２．２ ＨＥ染 各组小鼠的子宫组织用４％多聚甲醛固定２４ｈ，再经梯度酒精的洗涤与脱水以及二甲苯透明，浸在石蜡中进行组织包埋，以４μｍ厚度连续切片，然后进行标准ＨＥ染，中性树脂封片后置于光学显微镜下观
察并拍照。
１．２．３ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 提取各组小鼠子宫组织总蛋白和组蛋白，具体操作步骤参照试剂盒说明书。然后将提取的各组子宫组织的蛋白进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ电泳，分别用ＧＡＰＤＨ（１∶１００００）；Ｈ３（１∶１０００）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ１（１∶２００）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ２（１∶２００）；Ｈ３Ｋ４ｍｅ３（１∶２００）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ１（１∶２００）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ２（１∶２００）；Ｈ３Ｋ９ｍｅ３（１∶２００）；Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（１∶３００）；ＧＬＰ（１∶４００）；Ｇ９ɑ（１∶４００）和ＥＺＨ２（１∶２００）抗体孵育。实验结束后用Ｉｍａｇｅ Ｊ软件对光密度值进行定量检测，对不同分子量蛋白的表达情况进行分析。
１．３ 统计学分析 应用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７ ００统计软件分析数据，两组间比较采用独立样本ｔ检验，多组间比较采用单因素方差分析。
２ 结果
２．１ ＴＳＡ抑制ＣＳ暴露导致的子宫组织结构改变 ＣＳ暴露后小鼠的子宫湿重降低，子宫肌层变薄、腺体和间质细胞数目减少，ＴＳＡ可以有效抑制ＣＳ暴露引起的小鼠子宫的上述形态学改变（见Ｆｉｇ１）。以上ＣＳ暴露导致的子宫组织结构改变和ＴＳＡ对子宫损伤的改善和我们先前的研究结果一致［６］
。
Ｆｉｇ１ ＴＳＡｒｅｌｉｅｖｅｄｃｈａｎｇｅｓｉｎｕｔｅｒｉｎｅｔｉｓｓｕｅ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃａｕｓｅｄｂｙＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ
ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｍｏｕｓｅｕｔｅｒｕｓｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＣＳｅｘｐｏｓｅｄｇｒｏｕｐａｎｄＣＳｅｘｐｏｓｅｄ＋ＴＳＡｇｒｏｕｐ）
２．２ ＴＳＡ抑制ＣＳ暴露诱导的小鼠子宫组织组蛋白Ｈ３Ｋ９ｍｅ１修饰水平变化 采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技
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术检测了各组（对照组、ＣＳ暴露组和ＣＳ＋ＴＳＡ组）小鼠子宫组织组蛋白中Ｈ３Ｋ４ｍｅ１、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２、Ｈ３Ｋ４ｍｅ３、Ｈ３Ｋ９ｍｅ１、Ｈ３Ｋ９ｍｅ２、Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３总的修饰水平，结果表明，ＣＳ暴露后小鼠子宫组织总Ｈ
３Ｋ９ｍｅ１表达水平明显升高，ＴＳＡ有效抑制了ＣＳ暴露诱导的小鼠子宫组织Ｈ３Ｋ９ｍｅ１的表达。此外，ＣＳ暴露后小鼠子宫组织总Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３表达水平明显升高，ＴＳＡ进一步激活了小鼠子宫组织总Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３表达水平。其他检测的组蛋白总的修饰水平在各鼠子宫组织中的改
变差异无统计学意义（见Ｆｉｇ２）。因此，结果表明Ｈ３Ｋ９ｍｅ１和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３组蛋白修饰水平变化参与烟草烟雾对小鼠子宫的损伤过程，且Ｈ３Ｋ９ｍｅ１组蛋白修饰水平的变化在Ｔ
ＳＡ缓解的烟草烟雾暴露
所致的小鼠子宫损伤过程中发挥重要作用。
Ｆｉｇ２ ＨｉｓｔｏｎｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｕｔｅｒｉｎｅｉｎｊｕｒｙａｌｌｅｖｉａｔｅｄｂｙＴＳＡｉｎｆｅｍａｌｅｍｉｃｅ
ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＴＳＡｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｇｌｏｂａｌＨ３Ｋ９ｍｅ１ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｆｕｒｔｈｅｒａｇｇｒａｖａｔｅｄＨ３Ｋ２７ｍｅ３ｃｈａｎｇｅｉｎ ｄｕｃｅｄｂｙＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ．
Ｐ＜０ ０５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＣＳ
２．３ 组蛋白甲基转移酶在小鼠子宫组织中的表达 Ｈ３Ｋ９ｍｅ１和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３组蛋白修饰水平变化参与Ｃ
Ｓ对小鼠子宫的损伤过程，为了探索组蛋白修饰水平改变的机制，我们进一步检测了各组小鼠子宫组织中组蛋白甲基转移酶ＧＬＰ（Ｈ３Ｋ９甲基转移酶）、Ｇ９ɑ（Ｈ３Ｋ９甲基转移酶）和ＥＺＨ２（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３甲基转移酶）的表达水平。结果发现：ＣＳ暴露后小鼠子宫组织ＧＬＰ和Ｇ９ɑ表达水平增加，ＴＳＡ抑制了ＣＳ暴露激活的小鼠子宫组织ＧＬＰ和Ｇ９ɑ的表达。此外，
ＣＳ暴露后小鼠子宫组织中ＥＺＨ２表达水平增加，应用ＴＳＡ后进一步激活了ＣＳ暴露诱导的ＥＺＨ２表达水平（见Ｆｉｇ３）。我们的研究结果表明：组蛋白甲基转移酶（ＧＬＰ、Ｇ９α、ＥＺＨ２）表达水平的增加在烟草烟雾对小鼠子宫的损伤中发挥作用，ＧＬＰ、Ｇ９α
和ＴＳＡ改善在ＣＳ暴露引起的子宫组织形态改变过
程中起到一定的作用。
Ｆｉｇ３ Ｈｉｓｔｏｎｅｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆ
ｕｔｅｒｉｎｅｉｎｊｕｒｙａｌｌｅｖｉａｔｅｄｂｙＴＳＡｉｎｆｅｍａｌｅｍｉｃｅ
ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＴＳＡｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄＧＬＰａｎｄＧ９ɑｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍｉｃｅｕｔｅｒｉｎｅｔｉｓｓｕｅｉｎ ｄｕｃｅｄｂｙＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ，ｂｕｔｆｕｒｔｈｅｒａｃｔｉｖａｔｅｄＥＺＨ２ｉｎｃｒｅａｓｅ． Ｐ＜０ ０５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＣＳ
３ 讨论
本研究发现，ＣＳ暴露后小鼠的子宫腺体和间质细胞数目减少，ＴＳＡ可以有效抑制ＣＳ暴露引起的小鼠子宫的上述形态学改变。以上ＣＳ暴露导致的
·２
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子宫组织结构改变和ＴＳＡ对子宫损伤的改善和我们先前的研究结果一致［７］。研究发现ＣＳ中的有害物质可以导致肺上皮细胞中ＤＮＡ甲基化和组蛋白修饰发生变化［１３－１５］。但是，在子宫组织中ＣＳ暴露能否通过改变组蛋白修饰参与其对子宫的毒理作用和ＴＳＡ的缓解过程，目前尚不清楚。为进一步探究组蛋白修饰水平变化在ＣＳ暴露对小鼠子宫的毒理作用以及在ＴＳＡ对子宫损伤的改善中的作用，我们采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测了各组小鼠子宫组织组蛋白中Ｈ３Ｋ４ｍｅ１、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２、Ｈ３Ｋ４ｍｅ３、Ｈ３Ｋ９ｍｅ１、Ｈ３Ｋ９ｍｅ２、Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３总的修饰水平。结果表明：Ｈ３Ｋ９ｍｅ１和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３组蛋白修饰水平变化参与ＣＳ对小鼠子宫的损伤过程，且Ｈ３Ｋ９ｍｅ１组蛋白修饰水平的变化在ＴＳＡ缓解的ＣＳ暴露所致的小鼠子宫损伤过程中发挥重要作用。环境毒素可以通过表观遗传学机制影响基因表达水平。本研究发现Ｇ９ɑ和ＧＬＰ调节的总Ｈ３Ｋ９ｍｅ１组蛋白修饰水平变化参与ＣＳ对小鼠子宫的损伤和ＴＳＡ的缓解过程。但是，Ｈ３Ｋ９ｍｅ１组蛋白修饰水平变化后影响了下游哪些基因的表达，目前尚不清楚。我们前期发现ＣＳ暴露能够通过激活小鼠子宫组织中ＨＤＡＣ１／２、ｍＴＯＲ和Ｐ２ＲＸ７介导的细胞焦亡导致子宫肌层和子宫内膜变薄，而ＴＳＡ可以抑制ＨＤＡＣ１／２、ｍＴＯＲ和Ｐ２ＲＸ７的活化，缓解ＣＳ暴露引起的子宫组织形态改变［６－７］。ＣＳ暴露和ＴＳＡ处理后子宫组织中ＨＤＡＣ１／２、ｍＴＯＲ和Ｐ２ＲＸ７表达水平的变化是否和Ｈ３Ｋ９ｍｅ１组蛋白修饰水平变化有关，值得我们后续深入研究。
我们进一步检测了各组小鼠子宫组织中组蛋白甲基转移酶ＧＬＰ（Ｈ３Ｋ９甲基转移酶）、Ｇ９α（Ｈ３Ｋ９甲基转移酶）和ＥＺＨ２（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３甲基转移酶）的表达水平。ＣＳ暴露后小鼠子宫组织ＧＬＰ和Ｇ９α表达水平增加，ＴＳＡ抑制了ＣＳ暴露激活的小鼠子宫组织ＧＬＰ和Ｇ９α的表达。此外，ＣＳ暴露后小鼠子宫组织中ＥＺＨ２表达水平增加，应用ＴＳＡ后进一步激活了ＣＳ暴露诱导的ＥＺＨ２表达水平。我们的研究结果表明：组蛋白甲基转移酶（ＧＬＰ、Ｇ９α、ＥＺＨ２）表达水平的增加在烟草烟雾对小鼠子宫的损伤中发挥作用。此外，ＧＬＰ、Ｇ９α在ＴＳＡ改善ＣＳ暴露引起的子宫组织形态改变过程中起到一定的作用。组蛋白甲基转移酶（ＧＬＰ、Ｇ９α和ＥＺＨ２）在子宫组织中的作用，目前很少文献报道。Ｇ９ɑ（Ｈ３Ｋ９甲基转移酶）在子宫内膜癌组织中表达升高，Ｇ９ɑ通过抑制Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ影响内膜癌的转移和进展。提示Ｇ９ɑ调节的表观遗传通路可能作为子宫内膜癌的潜在靶点［１６］。新生儿暴露于二乙雌酚可引起小鼠子宫癌，ＤＥＳ可明显降低ＥＺＨ２、组蛋白赖氨酸乙酰转移酶２Ａ和组蛋白去乙酰化酶ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２和ＨＤＡＣ３的表达水平［１７］。子宫组织中ＥＺＨ２的表达水平和子宫的发育阶段和激素水平有关，ＥＺＨ２表达缺失可导致异常的子宫上皮增生、子宫肥大，表明ＥＺＨ２在子宫发育和功能中起着至关重要的作用［１８］。本研究中发现ＣＳ暴露后小鼠子宫组织组蛋白甲基转移酶ＧＬＰ、Ｇ９α和ＥＺＨ２表达水平增加，表明这些酶的激活和ＣＳ暴露对子宫组织的损伤有关。提示ＧＬＰ、Ｇ９ɑＥＺＨ２可能作为靶向烟草烟雾暴露导致的女性生育能力受损的新的靶点。然而，ＴＳＡ进一步加剧烟草烟雾暴露激活的ＥＺＨ２和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３修饰水平变化。提示：ＴＳＡ对烟草烟雾暴露激活的ＥＺＨ２和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３修饰水平没有缓解作用。
综上所述，组蛋白修饰变化参与ＴＳＡ缓解的烟草烟雾暴露所致的小鼠子宫损伤过程。本研究为阐明表观遗传机制在烟草烟雾暴露导致的女性生育能力受损中提供了前期基础，为未来吸烟引起的女性不孕提供了新的靶点和思路。
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｆｅｂ；３７（２）
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ＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｈｉｓｔｏｎｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｕｔｅｒｉｎｅｉｎｊｕｒｙａｌｌｅｖｉａｔｅｄｂｙＴＳＡｉｎｆｅｍａｌｅｍｉｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅｅｘｐｏｓｕｒｅ
ＬＯＵＹｉ１，ＣＯＮＧＹａｎ ｆｅｉ２，ＤＩＮＧＪｉｎｇ ｊｉｎｇ２，ＬＩＦａｎｇ２，ＷＡＮＧＬｉ ｌｉ２
（１．ＤｅｐｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０１２２，Ｃｈｉｎａ；
２．ＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＳｈｅｎｇｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＢｅｎｘｉＬｉａｏｎｉｎｇ １１７０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｗｈｅｔｈｅｒｈｉｓｔｏｎｅｍｏｄｉｆｉｃａ ｔｉｏｎｓａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｕｔｅｒｉｎｅｉｎｊｕｒｙａｌｌｅ ｖｉａｔｅｄｂｙＴＳＡｉｎｆｅｍａｌｅｍｉｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ（ＣＳ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＦｅｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏＣＳｔｗｉｃｅｄａｉｌｙｆｏｒ３０ｄａｙｓａｎｄＴＳＡｗａｓｉｎ ｊｅｃｔｅｄｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｔｏＣＳ ｅｘｐｏｓｅｄｍｉｃｅｏｎａｌｔｅｒ ｎａｔｅｄａｙｓｉｎｔｈｅＴＳＡ ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ．ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｉｃｅｕｔｅ ｒｕｓａｆｔｅｒＣＳｅｘｐｏｓｕｒｅ；ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｇｌｏｂａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＨ３Ｋ４ｍｅ１，Ｈ３Ｋ４ｍｅ２，Ｈ３Ｋ４ｍｅ３，Ｈ３Ｋ９ｍｅ１，Ｈ３Ｋ９ｍｅ２，Ｈ３Ｋ９ｍｅ３ａｎｄＨ３Ｋ２７ｍｅ３ｉｎｕｔｅｒｉ．ＧＬＰ（Ｈ３Ｋ９ｈｉｓ ｔｏｎｅｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ），Ｇ９ɑ（Ｈ３Ｋ９ｈｉｓｔｏｎｅｍｅｔｈｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ），ＥＺＨ２（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３ｈｉｓｔ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｉｎｇｅｘｐｏｓｕｒｅ；ｈｉｓｔｏｎｅｍｏｄ ｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｕｔｅｒｕｓ；ＴＳＡ；Ｈ３Ｋ９ｍｅ１；ｈｉｓｔｏｎｅｍｅｔｈｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
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·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｆｅｂ；３７（２）
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