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科学与信息化2019年7月上 177
王奇
国家知识产权局专利局专利审查协作广东中心 广东 广州 510555
摘 要 本文分析了引物序列撰写的特点和各个数据库的标引差异，在此基础上，结合实际案例阐述了如何基于专利数据库和非专利数据库检索引物序列的新颖性文件，为引物序列的新颖性文件检索提供了全面高效的检索思路。关键词 引物；序列；新颖性；检索全面；标引
前言
引物是一段短的单链RNA 或DNA 片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3’端开始合成新的核酸链。人工合成的引物被广泛应用于聚合酶链式
反应、测序和探针合成等，引物是体外诊断领域专利申请主要保护的对象。2017年全球体外诊断（IVD ，In Vitro Diagnosis ）市场规模达到735亿美元，体外诊断中又以基因检测的发展最为迅速，包括无创产检和肿瘤检测等，特别是随着精准医疗的发展和应用，基于引物的体外诊断研发投入越来越大，相关专利申请量也不断增加。
对于涉及引物序列的专利申请，不管是在专利实质审查过程中，还是在FTO 检索和无效检索过程中，都需要涉及对引物序列的新颖性检索，目前引物序列的检索主要包括专利库和非专利库的检索，由于引物序列撰写的特殊性，不同数据库在标引和收录时存在较大的差异和不足，给检索带来了一定的困难，容易造成漏检。下面将结合实际案例介绍如何对引物序列进行有效的新颖性文件检索，以期为引物序列的新颖性检索提供更全面更高效的检索思路。
权利要求1：一种利用单拷贝核基因检测食品和饲料中绵羊源性成分的实时荧光PCR 检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 第一步，以待测样品的DNA 为模板，进行荧光定量PCR 扩增，获得PCR 扩增产物； 第二步，检测扩增产物的荧光信号； 第三步，以检测结果的Ct 值判定样品中是否含有绵羊源性成分以及定量检测样品中的绵羊源性成分的含量； 其中，用于PCR 扩增的反应体系中的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示。
本文仅以S E Q I D N O :1所示序列为例展示新颖性文件的检索过程，S E Q I D N O :1的序列具体为5’-CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA-3’1 专利库检索
1.1 全文专利数据库
在CNTXT/WOTXT/USTXT/EPTXT 等全文数据库中以CCAACA TGCCTTTAAACCCTCAA 以及其三字母、五字母或十字母一空格的形式进行检索，检索结果获得D1（CN106995852A ，本申请）和D2（CN109182471，非现有技术）。
1.2 中国专利生物序列检索系统中国专利生物序列检索系统的序列来源于从SIPO 受理的专利申请文件中提取出来的生物序列。
以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 进行检索，除获得D1（CN106995852A ）和D2（CN109182471）外，还检索获得D3（CN105985948）[1]。2 非专利库检索
2.1 Genbank和EMBL
Genbank 和EMBL 分别是由NCBI 和EBI 维护的核酸序列数据
库，Genbank 常用的序列检索工具是BLAST ，EMBL 中常见的序列检索工具是WU-BLAST 和FASTA 等。使用Genbank 和EMBL 数据库中的相应检索工具进行检索，未获得新颖性对比文件。
2.2 STN S T N 的核酸序列数据库主要来自C A S R E G I S T RY 、DGENE 、USGENE 和PCTGEN ，
其中，CAS REGISTRY 数据库内容涵盖数千种期刊、63个专利权威机构以及声誉良好的网络资源、论文、书籍和会议记录、化学品供应商等所有公开的化学和相关学科资料。
国家知识产权局专利审查协作中心通过STN 的SQEN 检索项命中4个结果，包括2篇专利文献和2篇非专利文献，其中，2篇专利文献即为D1和D2。两篇非专利文献分别是D4（Interlaboratory validation of a real-time PCR detection method for bovine and ovine-derived material ，2017）和D5（Lateral flow test for meat authentication with visual detection ，2019）。
2.3 Google学术Google 学术的文献来源包括免费的学术资源、免费获取的期刊网站、付费电子资源提供商以及美国的专利文献等。
（1）直接以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 进行检索，获得7篇非专利文献，其中2篇为前述的D4和D5。
D4：Interlaboratory validation of a real-time PCR detection method for bovine and ovine-derived material ，2017。
D5：Lateral flow test for meat authentication with visual detection ，2019。
D6：Droplet digital PCR methods for the detection and quantification of goat and sheep derivatives i
n commercial meat products ，2018。
D7：A multiplex real-time PCR method for the quantitative determination of equine(horse) fractions in meat products ，2017。
D8：A sensitive DNA-based fluorometric method for milk authenticity of dairy products based on spectrally distinct microspheres ，2017。
D9：DNA-based analytical methods for milk authentication ，2018。
D10：Rapid authentication of mutton products by recombinase polymerase amplification coupled with lateral flow dipsticks ，2019。
（2）以三字母一空格的形式“CCA ACA TGC CTT TAA ACC CTC AA ”进行检索，获得3篇非专利文献。以五字母或十字母一空格的形式未检索到新颖性文件[2]。
D11：Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef, pork, horse and sheep ，2011。
D12：Duplex digital PCR for the determination of meat proportions of sausages containing meat from chicken ，turkey ，horse ，cow ，pig and sheep ，2019。
D13：Interlaboratory validation of two multiplex quantitative
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