(.东港出入境检验检疫局 辽宁东港 118300 )
一、研究的目的与意义
水是人类及一切生物赖以生存且必不可少的重要物质，然而随着全球经济的发展，工农业的兴盛，人类的活动会使大量的工业、农业和生活废弃物排入水中，使水污染的情况日益严重。
水中生存着各种微生物，因此常以微生物种类和数量作为判断污染程度的指标。为了我们自身的健康及国民经济的高速发展，我们有必要要对饮用水和生产用水进行检测，排除水质问题所造成的隐患。水质中的微生物主要为一些有害细菌如伤寒、、痢疾和浮游生物如原生动物、藻类等，这些致病的微生物有的会传播各种传染病，与偶的会影响水的物理性质，并产生臭味和水。
针对水质中微生物的危害性，世界许多国家都根据自身情况对饮用水及其他水质做出了一些规定。各国对微生物指标限量要求各不相同。本研究报告以欧盟对水质中微生物指标的限量
要求，对六种水质中常见的微生物（细菌总数（37℃）、大肠杆菌、大肠菌、产气荚膜梭菌、铜绿假单胞菌和肠球菌）进行膜过滤法的检测。
二、实验方法
滤膜是一种薄的非纤维质膜，可以过滤介质，用于液体和气体过滤，孔的平均直径大于0.01um，可以截留大于规定孔径或在真空下交换滤膜面附近的粒子。与传统法相比具有快速、准确等优点。因此，利用滤膜法检测水质中常见的致病微生物检测 得到了世界各国家和地区的广泛认可。
目前，国内外制定的水质中微生物指标限量的标准主要包括：《GB/T 5750.12-2006 中国生活饮用水卫生标准》、《GB 17324-2003 中国瓶（桶）装饮用纯净水卫生标准》、《ISO 9308-1：2000 水质大肠杆菌和大肠菌检验和技术》、《ISO 6222：1999 水质平板菌落计数法》、《ISO 9308-2:1990 水质大肠菌，耐热大肠菌和可能大肠杆菌的检测和计数》、《欧盟饮用水水质条例（98/83/EC）》。
依以上标准作为研究参考，仔细研究讨论后，确定此次研究采用的方法为：利用膜过滤法检测水质中的常见致病微生物指标。
具体操作步骤为：
1、 样品制备：用无菌头取一定体积的样品（根据所含菌数进行相应的10倍梯度稀释），放入灭菌的三角瓶内，混匀，标明稀释梯度。
2、用火焰对不锈钢漏斗侧面及滤膜支撑网进行灭菌（也可用一次性塑料漏斗）。
3、冷却后，用无菌镊子将无菌滤膜放置于滤膜支撑网（带网格面朝上），并将漏斗与滤膜支撑网紧密结合。2020年国家公务员考试真题及答案下载
4、打开真空过滤装置的开关，将仪器阀门拨到6点钟方向（原来位置为3点钟方向），抽滤5分钟。
5、将样品缓慢导入漏斗内，开始过滤，当样品完全过滤后，把阀门拨到9点钟方向30秒，将多余的气体排出。
6、将阀门拨回到3点钟方向，关闭真空抽滤装置开关。
7、用无菌镊子将滤膜取下，放入相应培养基中（网格面朝上）进行培养。
8、结果解释与计算：对于每种测试的培养菌，计算五个或更多平行样品的初始菌体的算术平均值。
9、报告：结果报告中应该说明使用方法、获得的结果、清晰地表明使用的方法。结果报告中还应该包含滤膜、培养菌、培养基和使用稀释液的全部必要信息。
三、滤膜和培养基
滤膜：带有网格的0.45μm孔径亲水性滤膜
培养基：细菌总数—营养琼脂辽宁出入境检验检疫局
大肠杆菌河南理工大学研究生招生简章2022—MUG营养琼脂培养基（NA-MUG）
大肠菌—品红亚硫酸钠培养基
产气荚膜梭菌—改良mCP琼脂—铁牛奶培养基—巯基乙酸钠液体培养基
铜绿假单胞菌—假单胞菌琼脂—King's B培养基—乙酰胺肉汤—营养琼脂
肠球菌—lanetz and bartley 培养基—胆盐七叶苷叠氮钠琼脂
安全教育平台官方登录入口四、讨论
滤膜技术经常用于对水中微生物学的特性进行评估。水样品通过滤膜，再将吸附了细菌的滤膜转移到固体培养基表面。利用合适的培养基能够根据菌落特征的不同快速检测目标菌。需要注意的是滤膜法虽然具有重复性好，操作简单、能够现场完成过滤等特点，但对于大量水样及高浑浊度的水样都不适合此方法，因此，我们要根据检测水样的特征来运动相应的检测方法。
参考文献：
[1] GB/T 5750.12-2006 中国生活饮用水卫生标准
[2] GB 17324-2003 中国瓶（桶）装饮用纯净水卫生标准
[3] ISO 9308-1：2000 水质大肠杆菌和大肠菌检验和技术
[4] ISO 6222：1999 水质平板菌落计数法
[5] ISO 9308-2:1990 水质大肠菌，耐热大肠菌和可能大肠杆菌的检测和计数招警考试是什么
[6]河南renshi考试中心网 欧盟饮用水水质条例（98/83/EC）
[7] 黄大亮、宋文斌、陈溪、于晓婕，出口食品生产加工用水模块化检测方法。[M] 中国质检出版社
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